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AD7c-NTP的临床转化——向前一步
来源: | 作者:金贺 | 发布时间: 2018-12-11 | 908 次浏览 | 分享到:

阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease, AD),又称老年性痴呆,是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,具体表现为记忆力减退,认知能力下降以及运动障碍等,并伴随一系列精神症状,最终导致患者生活自理能力完全丧失。


随着社会人口老龄化的进展,AD已严重威胁人类健康,庞大的患者群体给家庭和社会带来了沉重的精神和经济负担,但该病的发病机制目前尚未明确。尸检研究证实β淀粉样肽(β-amyloid peptide, Aβ)沉积形成的老年斑(senile plaque, SP)和神经元纤维缠结(nerve fiber tangles, NFT)是AD的两大病理特征,并且已经被列入AD的诊断标准。


阿尔茨海默病相关神经丝蛋白(AD7c-NTP)是一种在神经元中表达的分子量约41k Da的跨膜磷蛋白。1996年麻省总医院的de la Monte教授首次发现AD7c-NTP在AD患者脑内表达水平升高,且出现在组织学尚完整的变性神经元中,证明异常AD7c-NTP表达增加是AD神经变性的早期事件。随后来自不同国家人群的大量研究证实AD7c-NTP存在于NFTs中,主要与诱发神经炎症及神经细胞死亡有关,是一种既能反应AD病理特点又具有较高灵敏性和特异性的AD生物标志物。



基于尿液中AD7c-NTP与脑组织和脑脊液中的该蛋白具有相同的分子质量,并且检测结果具有相似性,王蓉教授课题组于2011年成功研发了采用竞争酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿液中AD7c-NTP的诊断试剂盒,并在临床试验中验证了其诊断意义。作为一种无创性检查,尿标本中AD7c-NTP的检测比脑脊液标本具有更重要的临床意义,也更易于早期高危人群的筛查。 


AD7c-NTP检测试剂盒

 

为促进AD7c-NTP诊断试剂盒向临床应用转化,王蓉教授课题组在前期研究工作的基础上,进一步将实验室检测技术流程规范化,并与宣武医院循证医学中心方向华教授课题组合作,在大规模人群中验证了检测尿液AD7c-NTP的稳定性。相关论文由金贺博士撰写发表在Journal of Alzheimer’s Disease杂志。

 

1.实验室检测技术的标准化

Jin H, Wang R, Liu Z, Jia Q, Wu Y, Zhao Z, Wang Y, Zhang X. Some Methodological Characteristics of Alzheimer-Associated Urine Neuronal Thread Protein Detected by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay. J Alzheimer’s Dis. 2018;63(1): 255-262.


结合临床实际工作中遇到主要问题:患者主要来自门诊病人,不便于留取晨尿;尿液标本的保存时间、保存温度、防腐剂的选择。


该研究分别于早晨、上午、下午连续收集受试者尿标本;并将同一份尿标本分为不添加防腐剂组、NaHCO3作为防腐剂组、硼酸作为防腐剂组;以及-70℃保存组和-20℃保存组,分别保存不同时间。


The flow chart of this method. Part 1: Urine samples collected from 20 participants at three time points (morning, a.m. and p.m.) on five consecutive days; Part 2: (a) without any preservative (untreated), (b) containing boric acid (2 g/L) and (c) containing NaHCO3 (5 g/L); Part 3: (d)-(g) without any preservative stored at –20◦C, (h)-(k) without any preservative stored at –70◦C.


研究结果表明,AD7c-NTP的临床检测可以使用随机尿代替晨尿,在样品不能及时检测的情况下,硼酸可作为相对稳定的防腐剂,储存条件为4°C,标本严禁冷冻保存。该项实验室研究为临床检测尿液AD7c-NTP提供了标准化参考建议,并有效降低了因检测方法所带来的误差。


2. AD7c-NTP人群中分布及与常见疾病关系研究

Jin H, Guan S, Wang R, Fang X, Liu H, Wu Y, Zhang Y, Liu C. The Distribution of Urinary Alzheimer-Associated Neuronal Thread Protein and Its Association with Common Chronic Diseases in the General Population. J Alzheimer’s Dis. 2018;65(2):433-442.


为研究AD7c-NTP在人群中的分布情况以及老年期常见疾病是否影响尿液AD7c-NTP的检出水平,课题组采集了北京市(西城、房山、通州、延庆)1805名受试者的尿标本进行检测。


研究结果表明尿液中AD7c-NTP的检出水平不受教育程度、职业、BMI、居住地等人口学信息影响,与一些老年期常见疾病包括高血压、中风、糖尿病、脂代谢异常、肾功能不全、肿瘤、慢性肺病、慢性肝病、抑郁症等的发病亦没有相关性。该项研究采用大样本验证了尿液中AD7c-NTP检测的稳定性和特异性,为AD7c-NTP诊断试剂盒的临床转化提供了有力的证据。



AD7c-NTP研究现状


AD7c-NTP诊断试剂盒从基础到临床的转化,离不开团队成员十几年的不懈努力和将一项工作做到日臻完善的坚持和信心。该项成果为AD早期诊断提供了简单无创的方法,适于用在人群筛查、早期诊断和疗效观察,能够更多地造福患者是我们医务工作者共同的愿望。